1 材料

Trizol（Invitrogen）；荧光定量 PCR 仪（Thermo公司）；普通 PCR 仪（杭州晶格科学仪器有限公司）；逆 转 录 试 剂 盒（RevertAidTM first Strａnd cDNASynthesis Kit）（Thermo 公司）；AMPKα2 试剂盒（北京博奥森生物技术有限公司）；β-Actin（北京中杉）；Western- 抗 二 抗 去 除 液（Beyotime）；QuantiFastSyBr Green PCR kit（Qiagen）；引物合成（生工生物工程上海股份有限公司）；预染蛋白 Marker；VE-180 型电泳槽；VE-186 型转膜仪（Tanon）；高速台式冷冻离心机（安徽嘉文仪器装备有限公司）；EPS 300 型 电 泳 仪（Bioworld Tanon）；LX300 型微量离心机（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；PVDF 膜（Millipore）；电热恒温箱 DNP9052BS- Ⅲ（上海三发）；生物信号采集系统（成都泰盟科技有限公司 BL-420S 生物机能实验系统）。

2 方法

取梗死区心肌组织 100 mg，放入添加 RIPA 细胞裂解液，冰上匀浆，离心取上清液，BCA 试剂盒测量各组样品总蛋白浓度。将蛋白样品与 5xSDS-PAGE 蛋白上样缓冲液均匀混合，热水浴 5 min。经 SDS-PAGE 行凝胶电泳，转 PVDF 膜，加入 Western 封闭液室温封闭 2 h。参考说明书一抗 4 ℃孵育过夜，二抗孵育 2 h，洗膜后置于暗室曝光、显影，最后使用 Image J 软件分析显影条带，以目的蛋白与 GAP-DH 条带灰度值比值作为 AMPK 蛋白的相对表达量。采用 SPSS 18.0 进行统计学分析。连续型变量以均数 ± 标准差（x ± s）表示，多组之间均数比较采用单因素方差分析，方差齐时 2 组之间均数比较采用SNK法，方差不齐时采用Dunnett法，以P ＜0.05为差异具有统计学意义。

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